Для идентификации биологического материала используют

Важная информация в статье: "Для идентификации биологического материала используют" с профессиональной точки зрения. Все вопросы можно задавать дежурному специалисту.

Для идентификации биологического материала используют

В основе типирования лежат две характеристики ДНК как носителя генетической информации: 1) последовательность составляющих ДНК элементов (нуклеотидов) имеет индивидуальные особенности у каждого отдельного животного или растения, кроме идентичных (однояйцовых) близнецов или клонированных организмов; 2) у каждой особи ДНК всех соматических клеток (клеток тела) совершенно одинакова.

Для ДНК-идентификации можно использовать любой биологический материал из живого или мертвого организма, например кровь, семенную жидкость, слюну, корни волос, кожу или же листья либо семена растений. Важно только, чтобы ДНК не была разрушена. На практике при проведении генетического типирования с целью идентификации личности или степени генетического родства (близости или отдаленности) сравнивают профили ДНК из нескольких биологических образцов и оценивают полученный результат, используя вероятностный и статистический анализ.

Процедура типирования состоит из следующих основных этапов: выделение (экстракция) ДНК из биологического материала; «разрезание» полученной ДНК на фрагменты разной длины с помощью специальных ферментов; разделение и выстраивание фрагментов по размерам; гибридизация (связывание) полученных фрагментов ДНК с радиоактивными зондами – цепочками сходной ДНК; фиксация пространственного распределения фрагментов методом радиоавтографии, т.е. на рентгеновской пленке. Связанные с радиоактивными зондами фрагменты исследуемой ДНК засвечивают рентгеновскую пленку в виде располагающихся друг под другом черных полосок, так что радиоавтограф ДНК внешне напоминает штриховые коды на упаковках товаров в магазинах.

Типирование ДНК находит разнообразное применение: в популяционно-генетических исследованиях для определения происхождения популяций людей, животных или растений; в практике судебной медицины для анализа биологических улик; для определения отцовства или степени родства; для генетического анализа клеток костного мозга при его трансплантации от донора реципиенту; для определения происхождения охотничьих трофеев или мяса в случаях браконьерства; в селекционной работе для уменьшения вероятности инбридинга (близкородственного скрещивания) при разведении вымирающих видов; для подбора генетических маркеров у животных и растений, позволяющих проследить судьбу родительских признаков в поколениях; для разрешения спорных вопросов авторства при патентовании штаммов микроорганизмов и растений; для анализа эволюционного происхождения биологических видов. См. также НУКЛЕИНОВЫЕ КИСЛОТЫ.

Изолирование карбофурана из биологического материала, его идентификация и количественное определение

Publication in electronic media: 22.10.2011 under http://journal.forens-lit.ru/node/394
Publication in print media: Актуальные вопросы судебной медицины и права, Казань 2010 Вып. 1

Карбофуран – О-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарба-мат. Эмпирическая формула С12Н15О3N. Молекулярная масса 221,26. Синонимы – фурадан, куратер. Химически чистый карбофуран представляет собой белое кристаллическое вещество с температурой плавления 153-154 °С. Растворимость (при температуре 20 °С) в воде – 700 мг/л, в ацетоне – 150 г/кг, ацетонитриле – 140 г/кг, бензоле – 40 г/кг, диметилсульфоксиде – 270 г/кг, циклогексаноне – 90 г/кг [5]. При комнатной температуре нестабилен в щелочных растворах, стабилен в нейтральных и кислых. Разрушается гипохлоритом кальция [2, 3, 6].

Область применения препарата. Карбофуран – инсектицид и нематоцид системного, контактного и кишечного действия из группы эфиров карбаминовой кислоты. Зарегистрирован в России под торговым названием «фурадан» (текучая паста (350 г/л), используется в качестве инсектицида для рапса, горчицы, а также борьбы с комплексом почвообитающих и наземных вредителей сахарной и кормовой свеклы [2, 5].

Краткая токсикологическая характеристика. Карбофуран относится к чрезвычайно опасным веществам по острой пероральной (ЛД50 для крыс – 8,0 мг/кг, для мышей – 14,4 мг/кг, для собак – 15 мг/кг) [1, 3] и ингаляционной токсичности. Карбофуран обладает значительной токсичностью для теплокровных организмов и относится к 5 классу, а карбофос – к 3 классу токсичности. Кумулятивные свойства выражены слабо. Острое отравление сопровождается симптомами, характерными для действия антихолинэстеразных веществ. Гибель животных наступала в интервале от 10 мин до 4 часов при явлениях паралича дыхания. При однократном введении препарата, меченного С14, установлено, что 40-70% его выводится с мочой и около 3% с фекалиями. Метаболиты: сульфатные и глюкуроновые конъюгаты (в моче), 3-окси-1-глюкуронат (в желчи).

В литературе имеются данные об отравлениях карбофураном людей с летальным исходом [4]. В Татарстане случай отравления карбофураном впервые отмечен в 2009 г. Гражданка Я., 1975 г.р., выпила неизвестную жидкость и скончалась в приемном отделении ЦРБ. На вскрытии отмечено: язык, пищевод, желудок, тонкий кишечник розового цвета.

Для изолирования из биологического материала, затравленного карбофураном, нами были использованы два метода:

  1. подкисленной водой по Васильевой с последующей экстракцией хло-роформом из кислой среды при рН 2 и из щелочной среды при рН 9 из кон-трольной печени; выход карбофурана из кислой среды составил (61±5)% от добавленного количества, незначительную часть (1,7±0,5)% карбофурана экстрагировали из щелочной среды при рН 9;
  2. прямое экстрагирование хлористым метиленом из биологических жидкостей, выход карбофурана составил (54±6)% от добавленного количества.

Очистку проводили методом препаративной хроматографии. Аликвоты хлороформного извлечения при рН 2 после испарения растворителя подвергали хроматографированию на пластинках «Сорбфил-ПА» в системе толуол – ацетон (2:1). Участки пластинок, соответствующие зонам карбофурана, элюировали различными элюентами: 1) хлороформ – диэтиловый эфир (2:1); 2) гексан – ацетон (9:1); 3) хлористый метилен. Установлено, что наибольший выход препарата получен при использовании в качестве элюента хлористого метилена (на 15-20% больше, чем при использовании двух первых).

Читайте так же:  Замена паспорта в связи с изменением внешности

Для хроматографии в тонком слое сорбента на пластинках «Cорбфил-ПА» апробировали несколько систем растворителей (табл. 1).

Таблица 1. Величины Rf в различных системах растворителей

Система растворителей
Величина Rf
1. Толуол – ацетон (95:5) 0,45
2. Гексан — ацетон (3:2) 0,60
3. Бензол – этилацетат (13:7) 0,75

Проявление пятен (табл. 2) карбофурана основано на гидролизе препарата спиртовым раствором щелочи и образовании окрашенных соединений с солями диазония: прочный синий Б, прочный голубой Б, прочный красный Б.

Таблица 2. Проявляющие реагенты и окраска пятен

№ пп. Проявляющие реагенты Окрашивание
1 15% раствор гидроксида калия в спиртово-водном растворе и смесь 0,1% раствора пара-нитроанилина в 0,1 н растворе соляной кислоты и 4% раствора нитрита натрия (10:1) Красно-вишневое
2 15% раствор гидроксида калия в спиртово-водном растворе и 0,01% раствор прочного синего Б в ацетоне Желтое
3 Бромфеноловый реактив, нагревание 10 минут при температуре 50 оС и после охлаждения 5% раствор уксусной кислоты Желтое на фиолетовом фоне
4 1% раствор хлорида меди (11) в этиловом спирте Голубое

Окраска пятен на пластинке устойчива в течение 1,5 месяцев. При проявлении раствором прочного синего Б метаболиты карбофурана (табл. 3) детектируются пятнами различного цвета [1].

Таблица 3. Окрашивание и флуоресценция пятен карбофурана и его метаболитов

Карбофуран и метаболиты карбофурана Флуоресценция в УФ -свете Окрашивание пятен с прочным синим Б Величина Rf в системе гексан-ацетон (3:2)
Карбофуран Сиреневая Желтое 0,60
О-(2,3-дигидро-2,2-диметил-3-гидрокси-7-бензофу-ранил)-N-метилкарбамат Желтая Розовое 0,38
2,3-дигидро-2,2-диметил-3,7-бензофурандиол Фиолетовая Кирпично-красное 0,44
2,3-дигидро-2,2-диметил-3-кето-7-бензофуранил-N-метилкарбамат Желтая Сиреневое 0,49
2,3-дигидро-2,2-диметил-3-оксо-7-бензофуранол Желтая Фиолетовое 0,59
2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранол Оранжевая Оранжевое 0,78

Сухие остатки аликвот хлороформного извлечения из печени при рН 2 и контрольного раствора карбофурана растворяли в этиловом спирте и снимали спектр поглощения на спектрофотометре НР 8453 «Хьюлетт-Паккард» в интервале длин волн 220-400 нм. Наблюдали максимум поглощения карбофурана при длине волны 276 нм (рис. 1).


Рис. 1. УФ-спектрограмма карбофурана.

Идентификацию карбофурана (табл. 2) проводили на газовом хроматографе «Кристаллюкс-4000» с использованием пламенно-ионизационного детектора на капиллярной кварцевой колонке длиной 30 м, диаметром 0,32 мм, с нанесенной жидкой фазой OV-101, толщина плёнки жидкой фазы 0,5 мкм. Температура колонки 180 °С, испарителя и детектора 250 °С. Давление газа-носителя (азота) на входе в колонку 1 атм. Скорость воздуха 250 мл/мин, водорода – 30 мл/мин. Время удерживания карбофурана при исследовании стандартного раствора и исследуемых извлечений из кислой среды – 8,11 минуты. В извлечениях регистрировали также пики метаболитов с временем удерживания: 1,35; 2,42; 4,22; 5,59 мин и т.д.


Рис. 2. Хроматограмма ГЖХ исследования карбофурана.

Хромато-масс-спектрометрическое исследование карбофурана проводили на хроматографе «Agilent 6890 Series GC System» с масс-селективным детектором Agilent 5973N на капиллярной кварцевой колонке НР-5MS длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм с нанесенной диметилполисилоксановой фазой (толщина пленки фазы 0,25 мкм). Идентификацию компонентов исследуемых образцов проводили по масс-спектрам электронного удара, ионным масс-хроматограммам и библиотекам масс-спектров NIST02.L., WILEY7N.L., ТОХ3.L. На хроматограмме масс-спектрометрически (рис. 3, 4) идентифицировали пик карбофурана (основные ионы m/z = 164, 149, 131, 122, 123, время удерживания — 10,325 мин).


Рис. 3. ХМСС-исследование карбофурана.


Рис. 4. ХМСС-исследование карбофурана.

Количественное определение карбофурана проводили методом прямой калибровки на высокоэффективном жидкостном хроматографе Agilent Technologies серии 1100 с диодно-матричным детектором. Колонка Hypersil ODS. Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (40:60). Скорость потока элюента 1 мл/мл. Рабочая длина волны 278 нм. Объем вводимой пробы 20 мкл. Идентификацию проводили по сопоставлению времен удерживания и УФ спектрам контрольного и исследуемого образцов.

При проведении судебно-химического исследования карбофуран изолировали из желудка подкисленной водой с последующей экстракцией хлороформом при рН 2; из крови и желчи – прямой экстракцией хлористым метиленом. Подтверждена эффективность использованных методов для секционного материала, идентификацию карбофурана и его метаболитов проводили методами газо-жидкостной хроматографии, тонкослойной хроматографии, газовой хроматографии с масс-селективным детектором, высокоэффективной жидкостной хроматографии, спектрофотометрии в УФ-свете. Концентрация карбофурана в крови составила 78 мг/л, в желчи – 3,8 мг/л.

ДНК в криминалистике

Печать гена

Читать статьи по темам:

Читать также:

Серийного убийцу нашли по ДНК

Под тяжестью предъявленных улик и грамотно проведенных следственных действий и оперативных мероприятий подозреваемый дал признательные показания, в том числе в совершении еще двух убийств женщин.

Полиция требует конфиденциальную информацию из баз данных

Повышенный интерес государства к персональным данным граждан побудил многие компании публиковать так называемые «отчеты о прозрачности» – статистику обращений правоохранительных структур с требованиями раскрыть те или иные данные пользователей.

Гены и преступления

Новейшие методы ДНК-экспертизы уже сейчас позволяют определить, откуда человек родом, и описать его внешность. Но путь от уникальных разработок к повседневной практике лежит через громкие дела. Одно из них – идентификация останков семьи Николая II.

Читайте так же:  Договор аренды рабочего места парикмахера

Воров вычисляют с помощью синтетической ДНК

Продукты SelectaDNA продаются наборами для разных случаев – спрей, гель и прочие модификации. Рабочее вещество производитель называет синтетической ДНК.

Что скажешь, ген?

Всего в союзной программе «ДНК-идентификация» десять направлений исследований: пять в области медицины и столько же в криминалистике.

Электронное СМИ зарегистрировано 12.03.2009

Свидетельство о регистрации Эл № ФС 77-35618

Добавить материал

Спасибо, что решили отправить нам материалы

Спасибо от всех людей, желающих поглощать знания и заниматься научной деятельностью и, кроме того, от тех, кто желает получать плоды научной деятельности в виде улучшающих жизнь инноваций. Отправка Вами материалов позволит Вам скачивать электронные книги с нашего сайта. Однако, следует заметить, что отпарвляемый Вами материал не должен быть представлен в Интернете, иначе не будет смысла выкладывания на сайте материала, который и так без проблем найдут он-лайн. Проверить начличие такового в Интернете не сложно: заходите в поисковик (к примеру, яндекс), вводите цельный отрывок из текста материала (слов 20 подряд без знаков препинания — они будут только мешаться), желательно из середины работы, так как введения могут и присутствовать в Интернете, а основной текст — отсутствовать. После осуществления поиска, смотрите, не нашёл ли поисковик точно такой же текст (если он есть, то он обязательно будет входить в первую десятку найденых сайтов). Если текста не найдено — то можно отправлять материал и исправить то, что люди, которые, возможно, желают воспользоваться материалом, не могут найти его. Можно проверить наличие этого материала также и в других поисковиках.

Следует отметить, что для сайта очень большую ценность представляют материалы, которые едва ли можно найти в библиотеках, а именно — дипломные работы, диссертации, монографии и прочие Ваши работы, которые не распространяются в больших количествах в печатных изданиях, в отличие от учебных пособий, известных работ, и т.п., которые, однако, также обладают немалой научной ценностью и, как следствие, ценностью для всего человечества.

Вы можете отправить материал на наш почтовый ящик или заполнив форму ниже:


Молекулярно-генетические методы идентификации микроорганизмов

Эти методыосновываются на анализе нуклеиновых кислот микроорганизмов.

1. Рестрикционный анализ.Сущность метода заключается в обработке ДНК рестрикционными ферментами (специфическими эндонуклеазами), разрезающими молекулу ДНК по определенным последовательностям нуклеотидов. После этого анализируют полученные фрагменты, специфические для каждого вида или варианта микроорганизма.

2. Гибридизация ДНК.Метод основан на определении уникальных последовательностей генома микроорганизма, отражающих свойства вида или варианта. Сущность обнаружения таких участков ДНК основана на способности комплементарных последовательностей нуклеиновых кислот к гибридизации. Исследование проводят с помощью меченых ферментом, радионуклидом или флюорохромом нуклеиновых зондов, представляющих однонитевые фрагменты ДНК, комплементарные уникальным участкам микробного генома. Основной областью применения является идентификация трудно культивируемых или медленно растущих микробов (например, представителей родов Mycobacterium, Neisseria, Campylobacter). Метод молекулярной гибридизации требует большого количества молекулярных зондов, времени, сложен в постановке, не отличается высокой чувствительностью и широкого практического применения не нашел.

ПЦР широко используется в диагностических целях. Достоинства ПЦР как метода диагностики инфекционных заболеваний заключаются в следующем:

· ПЦР дает прямые указания на присутствие возбудителя в исследуемом материале без выделения чистой культуры.

· Метод обладает очень высокой чувствительностью (от нескольких до одного возбудителя в пробе) и 100% специфичностью. Количество исследуемого материала может составлять несколько десятков микролитров.

· Исследуемый материал может быть дезинфицирован с помощью химических или термических методов, что исключает инфицирование персонала в процессе проведения ПЦР.

· Простота исполнения, возможность полной автоматизации, быстрота получения результатов (4-5 часов) позволяет отнести ПЦР к экспресс-методам диагностики.

Рис. 9. Биочип

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Увлечёшься девушкой-вырастут хвосты, займёшься учебой-вырастут рога 9622 —

| 7580 — или читать все.

Идентификация образцов биологического материала с использованием ЛИС

Важнейшей процедурой первичной обработки образцов биологического ма­териала после взятия их у пациентов является их кодирование с целью последую­щей идентификации. Идентификация образцов от определенных пациентов наи­более рациональна с помощью штрих-кода.

Пробы, содержащие опасные инфекционные агенты, должны быть промар­кированы иначе, чем обычный биологический материал.

Маркировка биологического материала с помощью штрих-кода практически сводит к нулю вероятность ошибки при идентификации образца и вида исследо­вания. Исключается дублирование заказов на лабораторные исследования. Со­кращается число медицинского персонала, занятого в утренние часы сортиров­кой образцов биологического материала.

После ввода в компьютер заявок на лабораторные исследования формируют­ся и распечатываются этикетки со штрих-кодами. Медицинский персонал наклеи­вает их на одноразовые пробирки заранее или во время взятия материала.

Для удобства каждому виду исследования соответствует определенный цвет этикетки. Сразу после взятия биологического материала штрих-код пробирки считывается ручным сканером для регистрации времени взятия материала. При поступлении пробирок в лабораторию сканируется время доставки материала.

Использование для маркировки пробирок штрих-кодов позволяет заметно упростить регистрацию времени взятия и доставки материала в лабораторию. Для этого в кабинете взятия и доставки биологического материала могут исполь­зоваться настольные сканеры, а у лаборантов, производящих взятие крови, руч­ные переносные сканеры штрих-кодов. При взятии материала, сразу после наклейки

Читайте так же:  Налоговый вычет через работодателя

этикетки на пробирку, достаточно поднести штрих-код к сканеру и время взятия материала сразу попадает в ЛИС. Если сканер переносной, данные сохраняются в его памяти и в последующем передаются в ЛИС.

Для работы с амбулаторными пациентами могут использоваться заранее подготовленные наклейки со штрих-кодами, напечатанные в типографии, а для работы с заказами из других лечебно-профилактических учреждений можно ис­пользовать специальные бланки с этикетками штрих-кодов. В полях бланков впи­сываются Ф.И.О. пациента и перечень необходимых исследований. Этикетки на­клеиваются на пробирки при взятии биологического материала.

Видео (кликните для воспроизведения).

При поступлении бланков в лабораторию в ЛИС регистрируются паспорт­ные данные пациентов, указываются коды на наклейках пробирок, а также вво­дятся заявки на исследования.

Пациентам поликлиники, проходящим профилактические осмотры, этикетки со штрих-кодами могут выдаваться в регистратуре. При сканировании предъявлен­ных этикеток автоматически формируются заявки на лабораторные исследования.

Штрих-код пробирки автоматически задается при назначении пациенту ис­следований врачом-клиницистом или лаборантом. За каждым исследованием за­крепляется определенный штрих-код.

1. Виды штрих-кодов, рекомендуемых к использованию в КДЛ (рис. 1):

a. для стационарных больных;

b. для амбулаторных пациентов;

c. для внешних заказов.

2. Каждый из штрих-кодов содержит следующую информацию:

3. Порядковый номер пациента.

4. Коды лабораторных исследований.

5. Ф.И.О. и местонахождение пациента.

6. Код пациента в день исследования.

7. Идентификатор группы исследований (цифра 1 на рисунке — номер иссле­дования за день).

8. Номер амбулаторной карты пациента.

10. Штрих-код без незначащих нулей.

11. Наименование группы исследований.

15. Мержиевский Н.П. Травматологическое П.5

0000024 И 237 238

15. Мержиевский Н.П. Травматологическое П.5

Изолирование метформина из биологического материала и его идентификация

Publication in electronic media: 22.10.2011 under http://journal.forens-lit.ru/node/395
Publication in print media: Актуальные вопросы судебной медицины и права, Казань 2010 Вып. 1

В практике судебно-химического отделения имел место случай отравления препаратом «Сиофор» (действующее вещество – метформина гидрохлорид). Метформин (синонимы: Глиформин, Глюкофаг, Диформин, Diaberil, Diabetosan, Diabexil, Diformin, Diguanid, Glycoran, Melbin и др.) – N, N-диметилбигуанид:

представляет собой белый кристаллический порошок, легко растворимый в воде, растворимый в спирте, практически нерастворимый в хлороформе, эфире [1].

Метформин относится к синтетическим пероральным гипогликемическим (антидиабетическим) препаратам группы бигуанидов. Наибольший гипогликемический эффект наступает через 4-5 ч после применения препарата. Метформин применяют при лечении сахарного диабета 2 типа у взрослых в сочетании с инсулином при инсулинорезистентных формах диабета. Назначают внутрь во время или непосредственно после еды, начиная с 0,25-0,5 до 0,5-0,75 г 2-3 раза в день. Препараты группы гуанидинов (метформин, биформин, фенформин) были созданы и клинически использованы как пероральные гипогликемические средства в Европе в 1970 году. Однако, как отмечают зарубежные авторы, в 1977 году фенформин был запрещен к применению в Соединенных Штатах из-за его склонности вызывать серьезный молочный ацидоз.

Фармакокинетика. Метформин медленно всасывается после орального применения, практически не сязывается с белками крови. От 30 до 50% перо-ральной дозы его выводится с мочой в неизмененном виде в течение 24 часов и 30% в неизмененном виде с калом. Период полураспада метформина в среднем 6 часов. Биодоступность 50-60%. Отмечается, что после приема однократной пероральной дозы 500 мг пятерыми пациентами концентрация метформина в плазме их крови через 1-3 часа составила 1,0-2,3 мг/л. После приема однократной пероральной дозы 1500 мг у четверых из пяти пациентов концентрация метформина в плазме через 1,5 часа составила 3,1 мг/л. Максимальная концентрация в плазме не увеличивалась при длительном применении препарата, а концентрация в моче достигает 1600 мг/л [3].

Токсичность. В зарубежной литературе описаны 3 случая развития молочного ацидоза и вторичных почечных осложнений при длительном применении метформина, при этом концентрация метформина в плазме составила 45- 70 мг/л и пациентам назначали гемодиализ и форсированный диурез. После приема мужчиной 24 г метформина с суицидальной целью у него развился метаболический ацидоз, больной впал в кому (концентрация метформина в плазме составила 110 мг/л), смерть наступила через 40 часов.

В доступной нам литературе мы не встретили данных о методах изолирования метформина из биологического материала и его идентификации, поэтому судебно-химическое исследование проводилось экспериментальным путем.

Экспериментальная часть

  1. Изолирование метформина гидрохлорида из таблеток. 2 таблетки «Сиофор» по 500 мг измельчали в ступке, смешивали с водой, извлекали из кислой среды при рН=2 смесью хлороформ-эфир (2:1) и из щелочной среды при рН=9 хлороформом.
  2. Исследование биологического материала. Исходя из физико-химических свойств метформина, для изолирования были использованы два метода: а) подкисленной водой; б) подкисленным спиртом по Стассу-Отто.

Для идентификации выделенного метформина в биологическом материале использованы: хроматография в тонком слое сорбента, реакции окрашивания, спектрофотометрия в ультрафиолетовой области, высокоэффективная жидкостная хроматография. Из-за термолабильности метформина использование хромато-масс-спектрометрии и газовой хроматографии не представилось возможным.

Для хроматографии в тонком слое сорбента использованы хроматографические пластинки «Сорбфил-ПТСХ-П-А».

Таблица 1. Коэффициент распределения метформина в различных системах растворителей

Читайте так же:  Как отправить в налоговую форму р13001 электронно
№ пп. Системы растворителей Rf
1 Этилацетат – метиловый спирт – 25% раствор аммиака (85:10:5) 0,0
2 Хлороформ – ацетон – диоксан – 25% раствор аммиака (45-5-47,5-2,5) 0,0
3 Хлороформ – метиловый спирт (90-10) 0,0
4 Циклогексан – толуол – диэтиламин (75-15-10) 0,45
5 Метиловый спирт – 25% раствор аммиака 0,1

Лучшее разделение наблюдали в системе растворителей циклогексан – толуол – диэтиламин (75-15-10).

В качестве проявителей использовали: 1) подкисленный раствор йодплатината; 2) реактив Драгендорфа в модификации Мольдавера; 3) последовательно 10% раствор сульфата меди (II) и 10% раствор аммиака; 4) 10% раствор гексацианоферрата калия (II).

Таблица 2. Результаты окрашиваний

№ пп. Проявитель (реактив) Окрашивание
1 Подкисленный раствор йодплатината Коричневое
2 Реактив Драгендорфа в модификации Мольдавера Оранжевое
3 Последовательно 10% раствор сульфата меди (II) и 10% раствор аммиака Голубое, переходящее в пурпурно-красное
4 10% раствор гексацианоферрата калия (II) Белое

Выполнение реакции окрашивания (реакция Сакагучи на гуанидин). К аликвоте извлечений при рН=9 при охлаждении во льду прибавляли 1 мл 5% раствора едкого натра и 2 капли 1% спиртового раствора а-нафтола. Затем прибавляли 10 капель раствора гипобромита (свежеприготовленный раствор 2 г брома в 100 мл 5% раствора едкого натра). Наблюдали появление красной окраски. В качестве контрольного раствора использовали извлечение при рН=9 из таблеток «Сиофор», «холостого» раствора – хлороформ [2].

Для идентификации метформина, выделенного из биологического материала и таблеток «Сиофор», снимали спектр поглощения остатков извлечений из щелочной среды в метаноле на спектрофотометре HP «Хьюлетт-паккард» в интервале длин волн 220-400 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Наблюдали максимум поглощения метформина при 236 нм.

Идентификацию метформина (рис. 1) методом высокоэффективной жид-костной хроматографии проводили на хроматографе фирмы «Agilent Technologies» 1100 Series со спектрофотометрическим детектором на стандартной колонке из нержавеющей стали длиной 25 см с диаметром 4,6 мм, заполненной обращенно-фазным сорбентом Zorbax SB-С 18 (5 мкм). Температура колонки 25 °С. В качестве подвижной фазы был выбран раствор 0,01 М ацетата аммония в ацетонитриле в соотношении (35:65). Скорость элюирования 1 мл/мин. Детектирование проводили при длинах волн 220, 230, 236 и 254 нм. Вводимая доза 20 мкл. Время выхода метформина гидрохлорида при длине волны 236 нм 3,165 минуты. Исследование аликвоты извлечений при рН=9 проводили при той же длине волны, время выхода составило 3,174 минуты.


Рис. 1. Спектр метформина.

Согласно Кларку, минимально детектируемая концентрация метформина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в плазме 2,5 мг [4].

ДНК-идентификация

ДНК-идентификация, или типирование ДНК, установление генетической индивидуальности любого организма на основе анализа особенностей его дезоксирибонуклеинововой кислоты (ДНК). Получаемый при типировании «профиль» ДНК, как и отпечатки пальцев, может использоваться для идентификации личности.

В основе типирования лежат две характеристики ДНК как носителя генетической информации: 1) последовательность составляющих ДНК элементов (нуклеотидов) имеет индивидуальные особенности у каждого отдельного животного или растения, кроме идентичных (однояйцовых) близнецов или клонированных организмов; 2) у каждой особи ДНК всех соматических клеток (клеток тела) совершенно одинакова.

Для ДНК-идентификации можно использовать любой биологический материал из живого или мертвого организма, например кровь, семенную жидкость, слюну, корни волос, кожу или же листья либо семена растений. Важно только, чтобы ДНК не была разрушена. На практике при проведении генетического типирования с целью идентификации личности или степени генетического родства (близости или отдаленности) сравнивают профили ДНК из нескольких биологических образцов и оценивают полученный результат, используя вероятностный и статистический анализ.

Процедура типирования состоит из следующих основных этапов: выделение (экстракция) ДНК из биологического материала; «разрезание» полученной ДНК на фрагменты разной длины с помощью специальных ферментов; разделение и выстраивание фрагментов по размерам; гибридизация (связывание) полученных фрагментов ДНК с радиоактивными зондами – цепочками сходной ДНК; фиксация пространственного распределения фрагментов методом радиоавтографии, т.е. на рентгеновской пленке. Связанные с радиоактивными зондами фрагменты исследуемой ДНК засвечивают рентгеновскую пленку в виде располагающихся друг под другом черных полосок, так что радиоавтограф ДНК внешне напоминает штриховые коды на упаковках товаров в магазинах.

Типирование ДНК находит разнообразное применение: в популяционно-генетических исследованиях для определения происхождения популяций людей, животных или растений; в практике судебной медицины для анализа биологических улик; для определения отцовства или степени родства; для генетического анализа клеток костного мозга при его трансплантации от донора реципиенту; для определения происхождения охотничьих трофеев или мяса в случаях браконьерства; в селекционной работе для уменьшения вероятности инбридинга (близкородственного скрещивания) при разведении вымирающих видов; для подбора генетических маркеров у животных и растений, позволяющих проследить судьбу родительских признаков в поколениях; для разрешения спорных вопросов авторства при патентовании штаммов микроорганизмов и растений; для анализа эволюционного происхождения биологических вид

Шпаргалка: ДНК-идентификация

ДНК-идентификация, или типирование ДНК, установление генетической индивидуальности любого организма на основе анализа особенностей его дезоксирибонуклеинововой кислоты (ДНК). Получаемый при типировании «профиль» ДНК, как и отпечатки пальцев, может использоваться для идентификации личности.

В основе типирования лежат две характеристики ДНК как носителя генетической информации: 1) последовательность составляющих ДНК элементов (нуклеотидов) имеет индивидуальные особенности у каждого отдельного животного или растения, кроме идентичных (однояйцовых) близнецов или клонированных организмов; 2) у каждой особи ДНК всех соматических клеток (клеток тела) совершенно одинакова.

Читайте так же:  Дивиденды выплата и начисление

Для ДНК-идентификации можно использовать любой биологический материал из живого или мертвого организма, например кровь, семенную жидкость, слюну, корни волос, кожу или же листья либо семена растений. Важно только, чтобы ДНК не была разрушена. На практике при проведении генетического типирования с целью идентификации личности или степени генетического родства (близости или отдаленности) сравнивают профили ДНК из нескольких биологических образцов и оценивают полученный результат, используя вероятностный и статистический анализ.

Процедура типирования состоит из следующих основных этапов: выделение (экстракция) ДНК из биологического материала; «разрезание» полученной ДНК на фрагменты разной длины с помощью специальных ферментов; разделение и выстраивание фрагментов по размерам; гибридизация (связывание) полученных фрагментов ДНК с радиоактивными зондами – цепочками сходной ДНК; фиксация пространственного распределения фрагментов методом радиоавтографии, т.е. на рентгеновской пленке. Связанные с радиоактивными зондами фрагменты исследуемой ДНК засвечивают рентгеновскую пленку в виде располагающихся друг под другом черных полосок, так что радиоавтограф ДНК внешне напоминает штриховые коды на упаковках товаров в магазинах.

Типирование ДНК находит разнообразное применение: в популяционно-генетических исследованиях для определения происхождения популяций людей, животных или растений; в практике судебной медицины для анализа биологических улик; для определения отцовства или степени родства; для генетического анализа клеток костного мозга при его трансплантации от донора реципиенту; для определения происхождения охотничьих трофеев или мяса в случаях браконьерства; в селекционной работе для уменьшения вероятности инбридинга (близкородственного скрещивания) при разведении вымирающих видов; для подбора генетических маркеров у животных и растений, позволяющих проследить судьбу родительских признаков в поколениях; для разрешения спорных вопросов авторства при патентовании штаммов микроорганизмов и растений; для анализа эволюционного происхождения биологических видов.

ДНК-ИДЕНТИФИКАЦИЯ

ДНК-ИДЕНТИФИКАЦИЯ, или типирование ДНК, установление генетической индивидуальности любого организма на основе анализа особенностей его дезоксирибонуклеинововой кислоты (ДНК). Получаемый при типировании «профиль» ДНК, как и отпечатки пальцев, может использоваться для идентификации личности.

В основе типирования лежат две характеристики ДНК как носителя генетической информации: 1) последовательность составляющих ДНК элементов (нуклеотидов) имеет индивидуальные особенности у каждого отдельного животного или растения, кроме идентичных (однояйцовых) близнецов или клонированных организмов; 2) у каждой особи ДНК всех соматических клеток (клеток тела) совершенно одинакова.

Для ДНК-идентификации можно использовать любой биологический материал из живого или мертвого организма, например кровь, семенную жидкость, слюну, корни волос, кожу или же листья либо семена растений. Важно только, чтобы ДНК не была разрушена. На практике при проведении генетического типирования с целью идентификации личности или степени генетического родства (близости или отдаленности) сравнивают профили ДНК из нескольких биологических образцов и оценивают полученный результат, используя вероятностный и статистический анализ.

Процедура типирования состоит из следующих основных этапов: выделение (экстракция) ДНК из биологического материала; «разрезание» полученной ДНК на фрагменты разной длины с помощью специальных ферментов; разделение и выстраивание фрагментов по размерам; гибридизация (связывание) полученных фрагментов ДНК с радиоактивными зондами – цепочками сходной ДНК; фиксация пространственного распределения фрагментов методом радиоавтографии, т.е. на рентгеновской пленке. Связанные с радиоактивными зондами фрагменты исследуемой ДНК засвечивают рентгеновскую пленку в виде располагающихся друг под другом черных полосок, так что радиоавтограф ДНК внешне напоминает штриховые коды на упаковках товаров в магазинах.

Видео (кликните для воспроизведения).

Типирование ДНК находит разнообразное применение: в популяционно-генетических исследованиях для определения происхождения популяций людей, животных или растений; в практике судебной медицины для анализа биологических улик; для определения отцовства или степени родства; для генетического анализа клеток костного мозга при его трансплантации от донора реципиенту; для определения происхождения охотничьих трофеев или мяса в случаях браконьерства; в селекционной работе для уменьшения вероятности инбридинга (близкородственного скрещивания) при разведении вымирающих видов; для подбора генетических маркеров у животных и растений, позволяющих проследить судьбу родительских признаков в поколениях; для разрешения спорных вопросов авторства при патентовании штаммов микроорганизмов и растений; для анализа эволюционного происхождения биологических видов.

Источники


  1. Кучерена А. Г. Адвокатура в условиях судебно-правовой реформы в России; Юркомпани — М., 2015. — 432 c.

  2. Малько, А.В. Теория государства и права / А.В. Малько. — М.: Юридический центр Пресс, 2007. — 768 c.

  3. Теория государства и права. Введение в юриспруденцию. — М.: Юнити-Дана, 2012. — 128 c.
Для идентификации биологического материала используют
Оценка 5 проголосовавших: 1

ОСТАВЬТЕ ОТВЕТ

Please enter your comment!
Please enter your name here